一贯煎诱导骨髓间充质干细胞分化为肝细胞样细胞的实验研究

作者	单位	E-mail
平键，陈红云，周扬
徐列明	上海中医药大学附属曙光医院肝病研究所（上海201203）； 2.上海中医药大学肝肾疾病病证教育部重点实验室（上海201203）； 3. 上海中医药大学附属曙光医院肝硬化科（上海201203）	xulieming@126.com

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中文摘要:

目的体外实验观察一贯煎诱导分离培养的大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cell， BMSC）定向分化肝细胞的作用。方法采用全骨髓贴壁法分离原代大鼠BMSC，第3代细胞采用流式细胞仪分析表面细胞因子、诱导分化为脂肪细胞鉴定其干细胞特征；采用肝细胞生长因子联合成纤维细胞生长因子和一贯煎含药血清2种诱导方案连续培养BMSC共21 天，PCR检测细胞甲胎蛋白（α-fetoprotein， AFP）、白蛋白（albumin， Alb）、肝细胞核因子4α（hepatocyte nuclear factor4α， HNF4α）mRNA表达情况，细胞免疫荧光检测细胞AFP和细胞角蛋白18（cytokeratin 18， CK18）的表达，染色高碘酸－希夫反应法观察细胞糖原形成，Western blot法检测细胞CK18、Wnt 3α、α-catenin蛋白的表达情况。结果全骨髓贴壁法分离的BMSC高表达白细胞分化抗原（cluster of differentiation， CD）90、29、44，低表达CD34和CD11b，成脂诱导2周后油红O染色可见大量脂滴。一贯煎药物血清和细胞因子诱导均可提高BMSC表达Alb、AFP、HNF4αmRNA表达水平，促进CK18蛋白表达，诱导21 天后可检测到AFP和CK18的表达，可见细胞合成糖原颗粒，观察到BMSC内Wnt 3α和β-catenin表达下调。结论一贯煎可诱导大鼠BMSC向肝细胞样细胞分化，其机制与下调Wnt/ β-catenin信号通路有关。

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