基于Keap1-Nrf2/ARE信号传导通路探讨黄芪多糖改善干燥综合征模型大鼠心功能的机制

基金项目:国家中医药重点学科中医痹病学建设项目（No.国中医药发［2009］30号）；国家中医药管理局科研课题专项基金（No.04－05LP27）；安徽省科技厅科研计划项目（No.11010402170）；安徽中医内科应用基础与开发研究省级实验室项目（No.科条［2008］150号）；安徽中医学院科技创新团队项目（No.2010TD005）

作者	单位	E-mail
王芳,叶英法,张晓军
刘健	安徽中医药大学第一附属医院风湿免疫科（合肥230031）	liujianahzy@126.com

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中文摘要:

目的基于Keap1-Nrf2/ARE信号传导通路探讨黄芪多糖改善干燥综合征（Sjgren′s syndrome，SS）模型大鼠心功能变化的机制。方法将48只Wistar雄性大鼠按随机数字表法分为4组：空白对照组（空白组）、模型对照组（模型组）、黄芪多糖组（中药组）和羟氯喹组（西药组），每组12只，分别向每只大鼠（空白组除外）两后足跖部注射与弗氏完全佐剂充分乳化后的颌下腺蛋白混合抗原0.1 mL，诱导SS模型。致炎后第19天开始干预，空白组及模型组均给予等量生理盐水（1 mL/100 g），其余组分别给予黄芪多糖（1 mg/100 g）、羟氯喹（0.031 25 g/kg），各组每天干预1次，连续干预30天。给药结束后观察大鼠的体质量变化、饮水量变化、颌下腺指数、脾指数、腺体组织学变化；采用有创血流动力学监测SS模型大鼠心功能的变化；采用ELISA法检测血清中活性氧（reactive oxygen species，ROS）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、总抗氧化能力（total antioxidant capacity，TAC）、TNF-α、IL-35；HE染色观察心肌组织的病理学改变；免疫组化染色观察ROS、活性氮自由基（reactive nitrogen species， RNS）、谷胱甘肽（glutathione，GSH）、硫氧还蛋白（thioredoxin，TRX）表达；实时荧光定量PCR（real time fluorescence quantitative PCR，RTFQ-PCR）检测Keap1、Nrf2、ARE mRNA蛋白的表达；Western blot方法测定大鼠心肌组织γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-glutamic acid and a half long glycine synthetase，γ-GCS）、血红素氧合酶1（heme oxygenase-1，HO-1）蛋白表达水平。结果与空白组比较，模型组大鼠饮水量、颌下腺指数、脾指数、HR、心脏指数（HI）、左室收缩期压（LVSP）、左室舒张期压（LVEDP）、MDA、ROS、TNF-α、ROS蛋白表达、RNS蛋白表达、Keap1 mRNA、MafmRNA、Nfr2 mRNA、HO-1蛋白表达、γ-GCS蛋白表达升高（P<0.01），体质量、左室内压上升下降最大速率（±dp/dtmax）、SOD、TAC、IL-35、GSH、TRX蛋白表达降低（P<0. 01）。与模型组比较，两个给药组干预后大鼠饮水量、颌下腺指数、脾指数、LVEDP、MDA、ROS、TNF-α、ROS蛋白表达、RNS蛋白表达、Keap1 mRNA、Maf mRNA、Nfr2 mRNA、HO-1蛋白表达、γ-GCS蛋白表达均降低（P<0. 05），而大鼠的体质量、±dp/dtmax、SOD、TAC、 IL-35、GSH蛋白表达、TRX蛋白表达升高（P<0.05，P<0. 01）；西药组HR升高（P<0.05）；中药组HR、LVSP降低（P<0.05，P<0.01）。与西药组比较，中药组HR、LVEDP、±dp/dtmax、γ-GCS蛋白表达降低（P<0.05，P<0. 01），SOD、TAC、GSH、TRX、HO-1蛋白表达升高（P<0.01）。HI与ROS呈正相关（P<0.05）；LVSP、LVEDP与Keap1-Nrf2/ARE信号传导通路呈正相关（P<0.01），与TAC呈负相关（P<0.05，P<0.01）；±dp/dtmax与Keap1-Nrf2/ARE信号传导通路呈负相关（P<0.05），与TNF-α呈正相关（P<0.05）。结论干燥综合症大鼠存在心功能下降，黄芪多糖改善心功能的机制可能是与Keap1-Nrf2/ARE信号传导通路活化密切相关。

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