中药芷辛方对骨癌痛大鼠胶质细胞蛋白表达以及TLRs和NF-κB的影响

目的通过建立癌痛动物模型，探讨芷辛方的镇痛作用及对骨癌痛大鼠模型中脊髓胶质细胞蛋白［胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）、CD11b］表达以及Toll受体（Toll-like receptors， TLRs）和核因子κB （NF-κB）的影响。方法将20只SD雄性大鼠随机分为空白组（10只）、骨癌痛模型组（10只），通过左胫骨内接种含有3×103个Walker256嫁接的腹水瘤细胞液造模，并对这两组的大鼠进行行为学检测、X光片检测及HE染色的检测证实造模成功。依照此法将 70只雄性SD大鼠随机分为7组，每组10只。空白组（10只）、骨癌痛模型组（简称模型组，10只）、西药盐酸曲马多对照组（简称西药对照组，10只）、芷辛方高、中、低剂量组（每组各10只）、中药五灵止痛胶囊对照组（简称中药对照组，10只）。造模14天后开始灌胃，芷辛方高、中、低剂量组分别给予芷辛方水煎浓缩制剂（9、4.5、2.25 g/kg生药）。每天灌胃1次，连续7天。第21天取脊髓L4~L5段背角，分别应用免疫组化、逆转录－聚合酶链反应（RT-PCR）及蛋白质印迹法（Western blot）的方法，分别检验星形胶质细胞的标志性蛋白GFAP的变化，小胶质细胞的标志性蛋白CD11b表达变化以及髓内TLRs（TLR2、TLR4）和NF-κB的影响。结果与空白组比较，模型组大鼠体重增加迟缓甚至呈下降趋势（P<0.01）；自发性运动疼痛评分（SAPS）明显上升（P<0.01）；触诱发痛阈值（PWT）明显下降（P<0.05， P<0.01）；手术侧胫骨X线影像以及HE染色示：骨结构发生明显改变和破坏。免疫组化检测髓内星形胶质细胞的标记蛋白GFAP明显升高；NF-κB 蛋白水平升高（P<0.01）。与模型组比较，CD11b、TLR2、TLR4及NF-κB水平芷辛方中、高剂量组均明显下降（P<0.05，P<0.01）。结论芷辛方可抑制脊髓水平胶质细胞的增殖活化和TLRs（TLR2、TLR4）、NF-κB蛋白的激活，这可能是其镇痛机制之一。

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