温阳化浊通络方含药血清对系统性硬化病皮肤成纤维细胞TGF-β1/Smad 信号通路的影响

目的探讨温阳化浊通络方含药血清对系统性硬化病（systemic sclerosis， SSc）皮肤成纤维细胞TGF-β1/Smad 信号通路的影响。方法将36例SSc患者按随机数字表分为中药组、西药组和中西药组，每组12例，中药组予口服温阳化浊通络方汤剂（每日1剂），西药组予口服青霉胺片（每次0.125 g，每日2次）和醋酸泼尼松片（每次20 mg，每日1次），中西医组予口服青霉胺片、醋酸泼尼松片及温阳化浊通络方汤剂，治疗1个月制备含药血清；另取10例未治疗的SSc患者血清作为对照组。健康皮肤成纤维细胞来源于2例女性整形外科患者上臂外侧健康皮肤组织。各组血清分别加入SSc患者和健康皮肤成纤维细胞培养体系中。Western blot 法测定皮肤成纤维细胞转化生长因子-β1 Ⅰ型受体（transforming growth factor β1 receptor typeⅠ，TGF-β1 RⅠ）、TGF-β1Ⅱ型受体（TGF-β1 RⅡ）、p-Smad2/3及Smad7蛋白表达，RT-PCR法检测SSc皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原（Col-Ⅰ、Col-Ⅲ）mRNA的表达，ELISA法测定SSc皮肤成纤维细胞培养上清液中MMP-9及TIMP-1含量。结果与对照组比较，西药组、中药组和中西药组SSc患者和健康皮肤成纤维细胞TGF-β1 RⅠ、p-Smad2/3蛋白水平降低， Smad7蛋白水平升高（P<0.05， P<0.01），同时中西药组TGF-β1 RⅡ蛋白表达降低（P<0.05， P<0.01）；与西药组比较，中药组和中西药组TGF-β1 R Ⅰ、p-Smad2/3表达降低，中西药组Smad7蛋白表达升高（P<0.01）。SSc患者皮肤成纤维细胞中，与对照组比较，西药组、中药组和中西药组Col-Ⅰ、Col-Ⅲ mRNA表达水平降低（P<0.05， P<0.01），且中西药组Col-Ⅲ mRNA表达水平明显低于西药组（P<0.01）。与对照组比较，西药组、中药组和中西药组MMP-9水平及MMP-9/TIMP-1比值明显升高（P<0.05， P<0.01），而中药组和中西药组TIMP-1表达水平降低（P<0.01）；与西药组比较，中西药组MMP-9水平和MMP-9/TIMP-1比值升高，中药组和中西药组TIMP-1水平降低（均 P<0.01）。结论温阳化浊通络方含药血清可能通过调控SSc皮肤成纤维细胞TGF-β1/Smad 信号通路中关键分子TGF-β1 RⅠ、p-Smad2/3及Smad7的表达，抑制 TGF-β1/Smad 信号通路传导，减少 Col-Ⅰ、Col-Ⅲ 表达。

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