芍药苷对TNF-α诱导的内皮细胞TNFR1/NF-κB信号通路的抑制作用

目的研究芍药苷（paeoniflorin， PAE）对TNF-α诱导小鼠肾动脉内皮细胞TNFR1介导信号通路的抑制作用，试探讨其作用的分子机制。方法体外培养小鼠动脉内皮细胞。采用Western blot方法检测正常组（无血清培养基培养）、TNF-α组（无血清培养基培养2 h加TNF-α 30ng/mL 6 h）、PAE低浓度组（PAE 0.8 μmol/L培养2 h加TNF-α 30ng/mL 6 h）、PAE中浓度组（PAE 8 μmol/L培养2 h加TNF-α 30ng/mL 6 h）及PAE高浓度组（PAE 80 μmol/L培养2 h加TNF-α 30ng/mL 6 h）细胞间黏附分子－1（intercellular cell adhesion molecule-1，ICAM-1）的蛋白表达；以免疫荧光法检测正常组（无血清培养基培养）、TNF-α组（无血清培养基培养2 h加TNF-α 30ng/mL 45 min）、PAE高浓度组（PAE 80 μmol/L培养2 h加TNF-α 30ng/mL 45 min）核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）的核转位；以Western blot法检测正常组（无血清培养基培养）及PAE高浓度组（PAE 80 μmol/L培养2 h）ph-ERK和ph-p38表达；Western blot法检测正常组（无血清培养基培养）、TNF-α组（无血清培养基培养2 h加TNF-α 30ng/mL 30 min）、PAE高浓度组PAE 80 μmol/L培养2 h加TNF-α 30ng/mL 30 min）、p38抑制剂组（SB组，p38抑制剂SB238025 25 μmol/L预处理30 min， PAE 80 μmol/L处理2 h，最后TNF-α 30 ng/mL 30 min）及ERK抑制剂组（PD组，ERK抑制剂PD98059 50 μmol/L处理30 min，PAE 80 μmol/L处理 2 h，最后TNF-α 30 ng/mL 30 min）IκBα蛋白表达。结果与正常组比较，TNF-α组ICAM-1蛋白表达明显升高（P<0.01）；与TNF-α组比较，PAE高浓度组的ICAM-1表达受到显著抑制（P<0.05）。PAE高浓度组ph-p38及ph-ERK蛋白表达水平明显较正常组升高（P<0.05）。与正常组比较，TNF-α组IκBα表达水平下降（P<0.01）。与TNF-α组比较，PAE高浓度组可显著抑制 TNF-α诱导的IκBα蛋白降解（P<0.01），SB组可显著阻断PAE对IκBα蛋白降解的抑制作用（P<0.05）。正常组中NF-κB/p65信号主要位于胞浆中，TNF-α组在TNF-α刺激45 min可诱导NF-κB/p65由胞浆向细胞核转位，而PAE高浓度组可显著抑制TNF-α诱导的NF-κB/p65核转位。结论PAE抑制TNF-α诱导的ICAM-1表达，其作用与抑制TNFR1/NF-κB信号通路有关，p38参与介导此作用。

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