从白血病干细胞水平研究蝎毒多肽提取物逆转多药耐药机制

目的探讨蝎毒多肽（peptide extract from scorpion venom，PESV）对白血病干细胞（leukemic stem cell，LSC）在体内多药耐药（multidrug resistance，MDR）的影响。方法培养K562/A02细胞，在对数生长期收集并经免疫磁珠法分选出K562/A02干细胞备用；40只BABL/c裸鼠，取5只注射K562/A02干细胞形成皮下瘤块备用；采用随机数字表法将35只裸鼠分为正常对照组、模型组、耐阿霉素（Adriamycin，ADM）组、PESV组和ADM+PESV高、中、低剂量组，每组5只。正常对照组不作处理，其余各组包埋瘤块组织，造模后模型组给予1 mL生理盐水腹腔注射，每天1次；ADM组腹腔注射ADM 0.05 mg，隔天1次；PESV组腹腔注射PESV 2 μg，每天1次；ADM+PESV高、中、低剂量组腹腔注射ADM 0.05 mg，隔天1次，同时给予PESV（5、2、1μg）腹腔注射，每天1次。给药14天。流式细胞术检测P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）；RT-PCR检测乳腺癌耐药蛋白（breast cancer resistance protein，BCRP）、多药耐药基因1（multidrug resistance 1，MDR1）mRNA表达；免疫组化法检测乙醛脱氢酶1（aldehyde dehydrogenase 1，ALDH1）；Western blot 法检测磷脂酰肌醇3激酶（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）蛋白表达；ELISA检测核转录因子NF-κB含量。结果K562/A02细胞经免疫磁珠分选前后的CD34+CD38－细胞比率分别为31.5%、92.8%，耐药率（IC50）分别为（60.33±10.68） μg/mL、（58.33±9.72）μg/mL，造模裸鼠成瘤率为100%。与模型组比较，ADM组各项检测指标比较，差异无统计学意义（P>0.05）；PESV组BCRP、MDR1 mRNA和NF-κB因子水平比较，差异均有统计学意义（P<0.05）；ADM+PESV高、中、低剂量组P-gp值降低，PI3K蛋白表达下调（P<0.05），ADM+PESV高、中剂量组BCRP mRNA表达降低， MDR1 mRNA表达升高，差异均有统计学意义（P<0.05）； ADM+PESV高剂量组PI3K蛋白表达下调，差异有统计学意义（P<0.05）。分别与ADM组和PESV组比较，ADM+PESV高剂量组P-gp、BCRP mRNA、MDR1 mRNA、PI3K和NF-κB水平明显均下调，差异有统计学意义（P<0.05）。各组ALDH1阳性率比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。结论PESV联合ADM具有下调白血病K562/A02干细胞P-gp、BCRP、MDR1、PI3K、NF-κB的表达水平，可以增强白血病K562/A02干细胞在体内对ADM的敏感度，具有逆转其多药耐药作用。

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