苦参碱诱导人白血病耐药细胞K562/IM自噬和凋亡的研究

目的观察苦参碱对人白血病耐药细胞K562/IM自噬和凋亡的影响。方法（1）苦参碱及伊马替尼对细胞增殖及自噬情况检测：分别设空白对照组、不同浓度（0.25、0.50、1.00、2.00、5.00 mg/mL）苦参碱组和（0.05、0.25、0.50、5.00、20.00 μmol/L）伊马替尼组，MTT检测K562细胞和K562/IM细胞抑制率。分别设置空白对照组、0.4 mg/mL苦参碱组和0.5 μmol/L伊马替尼组，免疫荧光激光共聚焦检测K562细胞和K562/IM细胞自噬现象，Western Blot检测细胞中自噬标志蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、P62的表达。（2）苦参碱联合3-甲基腺嘌呤（3-MA）或雷帕霉素（rapamycin，Rapa）诱导K562/IM细胞自噬及凋亡情况变化的检测：实验分6组，空白对照组、苦参碱组（0.4 mg/mL苦参碱处理）、3-MA组（5 mmol/L 3-MA处理）、Rapa组（0.5 μmol/L Rapa处理）、苦参碱+3-MA组（0.4 mg/mL苦参碱+5 mmol/L3-MA处理）、苦参碱+ Rapa组（0.4 mg/mL苦参碱+0.5 μmol/L Rapa处理），采用MTT检测细胞的抑制率，流式细胞仪检测细胞凋亡水平；Western Blot检测细胞自噬标志蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、P62及凋亡相关蛋白Caspase-3表达。结果（1）苦参碱和伊马替尼作用K562、K562/IM细胞，细胞增殖受抑制明显（P<0.05），LC3-Ⅱ/Ⅰ的聚集明显增加，Beclin-1及LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达升高，P62蛋白表达减少（P<0.05），以K562/IM细胞更明显（P<0.05）。（2）苦参碱组K562/IM细胞增殖抑制率（36.32±2.21）%，凋亡率（15.35±0.39）%。苦参碱+3-MA组K562/IM细胞增殖抑制率升高［（65.25±2.06）%，P<0.01）］，凋亡率升高［（21.70±0.48）%，P<0.05］，同时Beclin-1及LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达下降，P62蛋白表达增强，Caspase-3表达增强（P<0.05）；而苦参碱+Rapa组作用则相反。结论苦参碱和伊马替尼均可抑制K562、K562/IM细胞增殖的同时可诱导自噬，以耐药K562/IM细胞株自噬明显。通过3-MA抑制自噬可增强苦参碱对细胞K562/IM作用的敏感性，而雷帕霉素减弱苦参碱作用。

英文摘要:

关闭