甲亢宁胶囊含药血清对M22刺激FRTL-5细胞增殖的影响及自噬在其中的作用

目的探讨甲亢宁胶囊含药血清对甲状腺刺激性抗体（TSAb）单克隆抗体M22刺激Fisher大鼠甲状腺细胞系（FRTL-5）增殖作用和自噬的影响。方法体外培养FRTL-5细胞，采用不同浓度及时间观察M22刺激细胞增殖的量效关系，并确定作用最佳浓度及时间并制备甲亢宁胶囊含药血清。将FRTL-5细胞分为模型组（M22刺激24 h+15%空白大鼠血清），中药低、中、高剂量组（M22刺激24 h后5%、10%、15%甲亢宁胶囊含药血清干预24 h），正常组（15%空白大鼠血清）。采用CCK8法、酶联免疫竞争法检测各组细胞增殖情况及上清液中cAMP水平。确定高剂量（15%）甲亢宁胶囊含药血清抑制细胞增殖作用最强后再将FRTL-5细胞分为正常组（15%空白大鼠血清）、模型组（M22刺激24 h+15%空白大鼠血清）和中药组（M22刺激24 h后15%甲亢宁胶囊含药血清干预24 h），透射电镜下观察各组细胞内自噬体的变化，Western blot检测各组细胞自噬相关LC3及Beclin1蛋白水平。结果M22对FRTL-5细胞的增殖影响呈现明显量效关系，确定1 μg/mL M22于24 h增殖作用最佳。与正常组比较，模型组FRTL-5细胞增殖活性明显增强（P<0.01），细胞上清液中cAMP释放量增加（P<0.01），自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin1表达减少（P<0.01）；与模型组比较，中药中剂量组和高剂量组FRTL-5细胞增殖被抑制（P<0.01），上清液中cAMP释放量减少（P<0.05， P<0.01），中药低剂量组作用差异无统计学意义（P>0.05），中药组自噬关键蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1表达均增高（P<0.01）。透射电镜提示，模型组较正常组自噬小体的数量减少，而中药组较模型组增多。结论M22可促进FRTL-5细胞增殖且导致细胞自噬异常，而中药甲亢宁胶囊可通过改善其自噬异常，进而发挥抑制FRTL-5细胞增殖的作用。

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