HIF-1α基因沉默联合丹参酮ⅡA抑制低氧人肝癌HepG2细胞增殖及其机制

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李国平	汕头大学医学院第二附属医院消化内科（广东515041）	guopingli8@163.com
蒲泽锦，刘丽璇，项梦琦

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中文摘要:

目的探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因沉默联合丹参酮ⅡA（Tanshinone ⅡA，Tan ⅡA）对低氧条件下人肝癌HepG2细胞增殖的影响及其机制。方法依据人HIF-1α基因信息筛选RNAi有效靶序列，设计慢病毒载体引物并构建质粒，包装慢病毒表达载体，转染HepG2细胞，沉默低氧条件下HepG2细胞株中HIF-1α基因表达。将细胞分为正常对照组（野生型HepG2细胞）、干扰对照组（HepG2细胞转染NC-shRNA）、干扰组（HepG2细胞转染HIF-1α-shRNA），应用化学缺氧法（150 μmol/L CoCl2）加入培养液模拟肿瘤细胞低氧微环境，采用Western Blot检测各组细胞HIF-1α蛋白表达证实基因沉默效果，采用CCK-8检测5 mg/L Tan ⅡA处理对低氧条件下各组细胞增殖活性的影响，采用Western Blot检测Tan ⅡA处理对各组细胞内p53和p21 CIP1/WAF1蛋白表达的影响。结果（1）HIF-1α-shRNA慢病毒载体包装成功且转染效率高，低氧培养各组细胞24 h后，与正常对照组及干扰对照组比较，干扰组细胞中HIF-1α蛋白表达明显降低（P<0.01）。（2）Tan ⅡA能时间依赖性抑制低氧条件下各组细胞增殖，与正常对照组及干扰对照组比较，干扰组细胞增殖明显活性下降（P<0.01， P<0.05）。（3）低氧培养各组细胞24 h，与正常对照组及干扰对照组比较，干扰组细胞中p53和p21 CIP1/WAF1蛋白表达水平明显增高（P<0.05）。结论HIF-1α基因沉默可增强Tan ⅡA对低氧HepG2细胞的增殖抑制作用，其机制可能与p53和p21 CIP1/WAF1蛋白水平上调有关。

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