南方红豆杉水提物抑制T790M突变及c-MET扩增导致的吉非替尼耐药体外研究

目的研究南方红豆杉水提物抑制T790M突变及c-MET扩增所致吉非替尼耐药机制。方法应用MTT法检测不同浓度南方红豆杉水提物（0.25、0.5、1、2、4 mg/mL）和吉非替尼（3、6、12、18、30 μmol/L）对H1975、H820细胞株增殖的影响，根据结果筛选最佳后续实验药物浓度，计算各组半数抑制浓度（IC50）和两药联合指数（CI）；将对照组（1640培养液）、南方红豆杉组（0.25 μmol/L）、吉非替尼组（3 μmol/L）及联合组（南方红豆杉0.25 μmol/L+吉非替尼3 μmol/L）H1975和H820细胞药物处理72 h后，采用 Western Blot检测EGFR、p-EGFR、AKT、p-AKT及PI3K蛋白表达，采用 qRT-PCR检测EGFR、PI3K及AKT mRNA表达。结果在H1975和H820细胞中联合组达到IC50所需的吉非替尼浓度明显小于吉非替尼组，且CI<1。在H1975细胞中，与对照组比较，南方红豆杉组EGFR、p-EGFR、PI3K及p-AKT蛋白表达降低（P<0.01， P<0.05），吉非替尼组AKT蛋白表达降低（P<0.05），联合组EGFR、p-EGFR、AKT、p-AKT及PI3K蛋白表达降低（P<0.01， P<0.05）。与吉非替尼组比较，南方红豆杉组EGFR、p-EGFR、p-AKT蛋白表达降低（P<0.01），联合组EGFR、p-EGFR、PI3K及p-AKT蛋白表达降低（P<0.01）。在H820细胞中，与对照组比较，南方红豆杉组EGFR、PI3K、p-AKT蛋白表达下调（P<0.01），联合组p-EGFR、PI3K、p-AKT蛋白表达降低（P<0.01）。与吉非替尼组比较，南方红豆杉组EGFR、p-AKT蛋白表达降低（P<0.01， P<0.05），联合组p-EGFR、PI3K、p-AKT蛋白表达降低（P<0.01）。在H1975及H820细胞中，与对照组比较，吉非替尼组AKT及PI3K mRNA表达降低（P<0.01， P<0.05），南方红豆杉组及联合组EGFR、AKT及PI3K mRNA表达降低（P<0.01）。与吉非替尼组比较，联合组EGFR、AKT及PI3K mRNA表达降低（P<0.01）。结论南方红豆杉水提物能增强吉非替尼对H1975、H820细胞增殖抑制作用，可抑制T790M突变和c-MET扩增所致的吉非替尼耐药，其机制与抑制EGFR/PI3K/AKT通路有关。

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