脊髓康通过IRE1-XBP1通路抑制内质网应激诱导的PC12细胞凋亡

基金项目:国家自然科学基金面上项目（No. 81573997）；国家自然科学基金青年基金项目（No. 81704100）；江苏高校"青蓝工程"资助项目（No. 苏教师〔2018〕12号）；2018年江苏省研究生科研创新计划（No. KYCX18_1546）；江苏高校优势学科（中西医结合）建设工程资助项目（No. 苏政办发［2018］87号）

作者	单位	E-mail
涂鹏程，郭杨
马勇	1. 南京中医药大学骨伤修复与重建新技术实验室（南京 210023）； 2. 南京中医药大学附属医院骨伤科（南京 210029）；3. 南京中医药大学中医学院·中西医结合学院（南京 210023）	zhongyi-my@263. net
王磊

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中文摘要:

目的基于IRE1-XBP1通路探究脊髓康（JSK）抑制内质网应激（ERS）诱导的PC12细胞凋亡的作用及机制。方法利用神经生长因子（NGF）诱导PC12细胞为神经元样细胞并通过流式细胞技术鉴定；诱导后细胞分为空白组（无干预措施）、模型组［2 μmol/L毒胡萝卜素（TG）］、脊髓康组（2 μmol/L TG及0.0521 g/mL JSK水提物冻干粉，合生药0.625 g/mL）；CCK8法检测各组细胞24、48、72 h增殖活性，流式细胞技术检测各组细胞凋亡状态，Western Blot与q-PCR检测1型内质网转膜蛋白激酶（IRE1）、X盒结合蛋白1（XBP1）、葡萄糖调节蛋白78（Grp78）及C/EBP同源蛋白（CHOP）的蛋白及mRNA表达情况，透射电镜扫描各组细胞观察细胞及内质网形态学特征。结果与空白组比较，模型组NGF诱导的神经元样PC12细胞增殖活性显著降低（P<0.05），晚期凋亡明显增高（P<0.01），电镜扫描显示其细胞粗面内质网结构肿胀，囊泡化，呈典型的细胞凋亡形态；Grp78、CHOP蛋白表达显著升高（P<0.05），XBP1及IRE1蛋白表达也有微微上调，但差异无统计学意义（P>0.05）；Grp78、CHOP、XBP1及IRE1 mRNA表达明显升高（P<0.05，P<0.01）。与模型组比较，JSK组24、48、72 h PC12细胞增殖活性升高（P<0.05），晚期凋亡及早期凋亡均明显降低（P<0.05，P<0.01）；Grp78、CHOP的蛋白及mRNA表达均降低（P<0.05），XBP1及IRE1蛋白及mRNA表达明显上调（P<0.05）。透射电镜观察JSK组内质网结构仍存在，存在完整的外膜，内质网膜破损较轻，可见部分凋亡形态学改变。结论JSK可能通过活化IRE1-XBP1途径改善TG诱导的内质网应激状态，从而抑制ERS导致的神经元样PC12细胞凋亡，这可能是其有效改善脊髓损伤后神经元功能修复的机制。

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