黄连解毒汤含药血清调控中性粒细胞功能的实验研究

目的观察黄连解毒汤含药血清对体外调控中性粒细胞功能的影响。方法 20 只 SD 大鼠每天给予黄连解毒汤 5 g/kg 灌胃，每 12 小时 1 次，共 5 次，制备黄连解毒汤含药血清。采用流式细胞仪分选C57 BL/6 小鼠骨髓和外周血中性粒细胞，给予不同剂量的黄连解毒汤含药血清和脂多糖（LPS）刺激 3 h，采用实时荧光定量 PCR 检测中性粒细胞炎性细胞因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-1β、IL-6 及 IL-12b 表达，确定 10%黄连解毒汤含药血清为最佳剂量。将 10%黄连解毒汤含药血清用于干预活化的中性粒细胞功能：（1）中性粒细胞给予佛波醇 12-十四酸酯 13-乙酸酯（PMA）刺激 5 min，流式细胞仪检测骨髓中性粒细胞产生活性氧（ROS）情况；（2）中性粒细胞给予 LPS 刺激 3 h，采用 PicoGreen dsDNA 定量检测试剂盒检测培养上清游离 DNA （cf-DNA）的含量；（3）免疫荧光法检测中性粒细胞形成的中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）情况；（4）中性粒细胞给予趋化因子 CXCL2、CXCL10、CCL3 诱导 3 h，流式细胞仪检测趋化的中性粒细胞数量；（5）中性粒细胞给予 LPS 刺激 20 h，流式细胞仪检测外周血中性粒细胞凋亡情况。结果 PMA 刺激中性粒细胞使 ROS 显著增多（P<0.05）；LPS 刺激 3 h，中性粒细胞产生的 cf-DNA 含量增多，NETs 形成增加，CXCL2，CXCL10、CCL3 使中性粒细胞趋化增多（P<0.05， P<0.01）；LPS 刺激 20 h 后，外周血中性粒细胞凋亡减少（P<0.05）；10% 黄连解毒汤含药血清可减少 ROS 产生，降低 cf-DNA 含量和NETs 形成，减少中性粒细胞趋化，促进中性粒细胞凋亡（P<0.05， P<0.01）。结论黄连解毒汤可调节中性粒细胞功能。

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