清肝九味散对肝纤维化大鼠Raf/MEK/ERK信号通路的影响

目的?观察清肝九味散对肝纤维化大鼠的干预作用及其潜机制。方法?采用随机数字表法将50只SD大鼠分为正常组、模型组、阳性对照组、蒙药低剂量组及蒙药高剂量组，每组10只。除正常组外，其余各组大鼠均通过腹腔注射四氯化碳（CCl4）建立肝纤维化模型。造模成功后，正常组大鼠给予蒸馏水灌胃，阳性对照组灌服水飞蓟素（SIL） 10 mg/kg；蒙药低、高剂量组每日分别灌服清肝九味散水煎液0.525、4.725 g/kg。各组均每天灌胃1次，连续8周。采用全自动生化仪检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）活性水平；HE染色法观察肝组织病理变化；免疫组化法检测肝组织平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达；实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测基质金属蛋白酶2 （MMP2）、Ⅰ型胶原α （COL1α）、基质金属蛋白酶抑制剂1 （TIMP1） mRNA水平；蛋白免疫印迹（Western Blot ）检测肝组织MMP2、TIMP1蛋白表达及Raf蛋白激酶1（Raf-1）、丝裂原活化细胞外信号调节激酶（MEK）、细胞外调节蛋白激酶（ERK）磷酸化水平的变化。结果?与正常组比较，模型组大鼠明显消瘦、暴躁，肝脏经HE染色后可见典型纤维化病理表现；阳性对照组和蒙药低、高剂量组大鼠一般状态有明显改善，肝脏病理损伤减轻，血清ALT、AST水平较模型组显著下降（P<0.01）； RT-PCR结果显示：与正常组比较，模型组MMP2、COL1α、TIMP1 mRNA表达显著升高（P<0.01）；与模型组比较，阳性对照组、蒙药低、高剂量组MMP2 mRNA表达明显升高，TIMP1、COL1α mRNA表达明显降低（P<0.01）。免疫组化结果显示：与正常组比较，模型组α-SMA蛋白阳性面积显著升高（P<0.01）；与模型组比较，蒙药低、高剂量组α-SMA蛋白表达均显著降低（P<0.01）。Western Blot结果显示：与正常组比较，模型组MMP2、TIMP1、p-Raf、p-MEK、p-ERK蛋白表达均显著升高（P<0.05）：与模型组比较，阳性对照组及蒙药高剂量组MMP2蛋白表达明显升高，阳性对照组及蒙药各剂量组TIMP1、p-Raf、p-MEK、p-ERK蛋白表达明显下降（P<0.05，P<0.01），且蒙药高剂量组较蒙药低剂量组下降更明显（P<0.01) 。结论?蒙药清肝九味散对CCl4诱导的肝纤维化大鼠一般状态有改善作用，能减轻大鼠肝脏的纤维增生程度，并通过调节MMPs/TIMPs体系促进细胞外基质（ECM）降解，其抗肝纤维化机制可能与抑制Raf/MEK/ ERK信号通路有关。

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