温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞凋亡的影响

目的?研究温化蠲痹方对微小核糖核酸-146a（miRNA-146a）/核因子κB（NF-κB）环路诱导胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）凋亡作用及其相关分子机制。方法?选用雌性Wistar大鼠25只，按随机数字表法分为正常组（10只）和造模组（15只），造模组采用尾部皮内多点注射牛Ⅱ型胶原乳剂的方法进行免疫，建立CIA模型。在造模成功后（12只，造模成功率为80%）随机选取10只作为模型组，分别取正常大鼠和CIA大鼠的关节滑膜，用组织块培养法培养出原代FLS，培养至第3代进行干预实验。分别过表达、沉默miRNA-146a，并加入通路阻断剂和含药血清共培养，应用荧光定量聚合酶链式反应（RT-PCR）检测miRNA-146a、肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）、白细胞介素-1受体相关激酶1（IRAK1）基因表达；Western Blot法检测磷酸化核因子κB p65（NF-κB p65，p-p65）、核因子κB抑制因子α（IκBα）、增殖细胞核抗原（PCNA）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）蛋白表达；流式细胞术检测各组FLS凋亡；CCK-8法检测各组FLS增殖。结果?与正常组比较，模型组大鼠足掌厚度明显增加（P<0.01）；正常转染miRNA-146a组miRNA-146a、TRAF6、IRAK1基因表达及PCNA、p-p65蛋白表达增加，Caspase-3、IκBα蛋白表达及FLS凋亡率降低（P<0.05）；正常转染反义miRNA-146a组miRNA-146a、TRAF6、IRAK1基因表达及PCNA、p-p65蛋白表达降低，Caspase-3、IκBα蛋白表达及FLS凋亡率增加（P<0.05）。与CIA对照组比较，CIA转染miRNA-146a组TRAF6、IRAK1基因表达及PCNA、p-p65蛋白表达增加，Caspase-3、IκBα蛋白表达及FLS凋亡率降低（P<0.05）；CIA转染反义miRNA-146a组TRAF6、IRAK1基因表达及PCNA、p-p65蛋白表达降低，Caspase-3、IκBα蛋白表达及FLS凋亡率增加（P<0.05）。加入NF-κB通路阻断剂后，随着阻断时间延长及PCNA、p-p65蛋白表达降低，Caspase-3、IκBα蛋白表达增加（P<0.05）。与对照血清组比较，中药含药血清组细胞增殖率降低（P<0.05）。结论?温化蠲痹方可以通过miRNA-146a/NF-κB环路诱导FLS凋亡、抑制FLS增殖。

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