重楼皂苷Ⅶ通过DNA损伤介导的p53信号通路诱导肺腺癌循环肿瘤细胞簇凋亡

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上官文姬,于盼,钱芳芳
田建辉	1.上海中医药大学附属龙华医院肿瘤科（上海?200032）；2.上海中医药大学附属市中医医院肿瘤临床医学中心（上海?200071）；3.上海市中医药研究院中医肿瘤研究所（上海?200032）	tjhhawk@shutcm.edu.cn

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目的?研究中药复方金复康中有效组分重楼皂苷Ⅶ诱导人肺腺癌循环肿瘤细胞簇（CTC-TJH-01）凋亡的作用及机制。方法?采用不同浓度的重楼皂苷Ⅶ（0、1.2、2.5、5、10、20 μmol/L）处理悬浮培养的CTC-TJH-01细胞簇，CCK-8法检测对CTC-TJH-01细胞簇增殖的影响；FCM法检测对细胞周期和细胞凋亡的影响；Hoechest 33258染色后免疫荧光法检测对细胞核损伤的影响；RNA-seq法检测对细胞基因表达的影响，并用Omics Bean-Cancer数据库分析差异基因及涉及的信号通路；蛋白质印迹法检测DNA损伤相关蛋白和p53信号通路相关蛋白的表达水平。结果?重楼皂苷Ⅶ的浓度高于为2.5 μmol/L时可抑制CTC-TJH-01细胞簇的增殖（P<0.05）；浓度为1.8、3.6 μmol/L时即可诱导CTC-TJH-01细胞簇的细胞周期阻滞在G0/G1期（P<0.05）；浓度为3.6 μmol/L时可诱导CTC-TJH-01细胞簇发生凋亡，且细胞核的荧光呈现高亮状（P<0.05）；蛋白质印迹法检测结果显示DNA损伤相关蛋白DFF45的表达水平下调；RNA-seq结果显示差异基因主要涉及p53和细胞周期信号通路，蛋白质印迹法检测结果显示，重楼皂苷Ⅶ可上调Cleaved-caspase 3、p53、p21蛋白的表达水平，下调Cyclin E、CDK2蛋白表达水平（P<0.05）。结论?重楼皂苷Ⅶ通过调控DNA损伤诱导肺腺癌循环肿瘤细胞簇凋亡，进而通过p53信号通路抑制肺腺癌循环肿瘤细胞簇增殖，这可能是金复康发挥抗肺癌转移作用的机制之一。

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