柴胡皂甙d对特发性肺纤维化肺泡上皮细胞自噬作用机制研究

目的研究柴胡皂甙d（SSd）对特发性肺纤维化（IPF）中Ⅱ型肺泡上皮细胞（AT-Ⅱ）自噬的调控作用及其对纤维化程度的干预作用。方法转化生长因子β1（TGF-β1，5 ng/mL）诱导A549细胞48 h建立肺纤维化细胞模型，分别联合SSd低、中、高浓度（2.5、5、10 μg/mL）、雷帕霉素（100 ng/mL）处理细胞。CCK8法检测各组细胞存活率，Western Blot法检测E-钙黏蛋白（E-cadherin）、Ⅰ型胶原蛋白（Col-Ⅰ）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Beclin1、微管相关蛋白1轻链3B-Ⅱ（LC3B-Ⅱ）/LC3B-Ⅰ、p62、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路活化蛋白表达水平，单丹磺酰尸胺（MDC）染色法检测细胞内自噬泡形成。结果与正常组比较，模型组细胞存活率下降（P<0.05），E-cadherin、Beclin1、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ蛋白表达水平亦降低（P<0.05，P<0.01），Col-Ⅰ、α-SMA、p62、mTOR通路活性蛋白表达水平升高（P<0.05，P<0.01），胞质内荧光标记的自噬泡较少。与模型组比较，SSd高浓度组细胞存活率升高（P<0.05），SSd组及雷帕霉素组E-cadherin、Beclin1、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ蛋白表达水平升高（P<0.05，P<0.01），Col-Ⅰ、α-SMA、p62蛋白表达水平降低（P<0.05，P<0.01），SSd高浓度组及雷帕霉素组p-mTOR/mTOR、p-AKT1/AKT1、p-S6K1/S6K1表达水平降低（P<0.05，P<0.01），SSd高浓度组及雷帕霉素组细胞质内荧光标记的自噬泡增多。与SSd低、中低浓度组比较，SSd高浓度组及雷帕霉素组Ecadherin、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ表达水平升高（P<0.05，P<0.01），Col-Ⅰ、α-SMA、p62表达水平降低（P<0.05，P<0.01）。结论 SSd可改善TGF-β1诱导的ATⅡ纤维化改变，可能通过抑制mTOR通路激活诱导细胞自噬发挥作用。

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