闹羊花毒素Ⅲ通过调控Wnt1/Dvl1/β-catenin通路影响成纤维样滑膜细胞增殖凋亡的实验研究

基金项目:湖南省教育厅科学研究项目（No.19C1384）；湖南省中医药管理局科研计划项目（No.2021161）；湖南中医药大学中药学一级学科开放基金项目（No.2020ZYX01）；湖南中医药大学青苗计划（No.校行人字[2017]25）；湖南省一流学科中药学（No.校行科字[2018]3）；2020年湖南省一流本科专业建设点（No.湘教通[2020]248 号）；2020年国家级一流本科专业建设点（No.教高厅函[2021]7 号）

作者	单位	E-mail
刘笑蓉	湖南中医药大学药学院（长沙?410208）	smile20211106@163.com
刘湘丹,王智,曾娟

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中文摘要:

目的探讨闹羊花毒素Ⅲ对类风湿关节炎（RA）的治疗作用及其机制。方法采用肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导RA成纤维样滑膜细胞（RA-FLS细胞）作为RA的细胞模型。以雷公藤多苷作为阳性对照药物，过表达蓬乱蛋白1（Dvl1）后加入闹羊花毒素Ⅲ研究其作用机制。细胞增殖毒性检测法（CCK-8法）检测细胞活力，蛋白质免疫印迹（Wester Blot）检测B淋巴细胞瘤-2蛋白（Bcl2）、Bcl2相关X蛋白（Bax）、无翅型MMTV整合位点家族成员1（Wnt1）、Dvl1、β-连环蛋白（β-catenin）的表达量，实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测Wnt1、Dvl1、β-cateni mRNA水平，酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清中IL-6、IL-8、IL-10、IL-4、CC趋化因子配体2（CCL2）、CC趋化因子配体5（CCL5）的含量。结果 RA细胞模型构建成功，随着闹羊花毒素Ⅲ浓度的增加，RA-FLS细胞增殖减缓（P<0.05），凋亡增加（P<0.01）；闹羊花毒素Ⅲ与雷公藤多苷降低了RA-FLS细胞中IL-6、IL-8、CCL2、CCL5并且增加了IL-10、IL-4的含量（P<0.05）；降低了Wnt1、β-catenin、Dvl1蛋白与mRNA的表达量（P<0.01）。闹羊花毒素Ⅲ可以逆转由过表达Dvl1所造成的RA-FLS细胞增殖的增加（P<0.05）、促炎因子（IL-6、IL-8）与趋化因子（CCL2、CCL5）的增加（P<0.05），并逆转Wnt通路中Wnt1，Dvl1，β-catenin蛋白与mRNA表达的增加（P<0.01）。结论闹羊花毒素Ⅲ通过调控Wnt1/Dvl1/β-catenin通路影响TNF-α诱导的RA-FLS细胞增殖凋亡及炎症因子等的变化，可能通过这种机制治疗RA。

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